▲本研究的第一作者Theo Roth（图片来源：UCSF）
而本篇《自然》上公布的方法看起来简单得不可思议：谁也没有想到，几十年前就在微生物研究中大放异彩的电穿孔技术（electroporation），竟能在细胞疗法的开发上焕发光彩。
“海格力斯的试炼”
许多看似简单的成果背后，往往有着常人难以想象的枯燥工作，这项研究也不例外。尽管在几十年前，我们就在微生物中尝试了电穿孔方法来引入外源DNA，但这种方法先前尚未在细胞疗法里得到广泛应用，不是没有原因的。
在电穿孔技术中，研究人员们会给细胞施加一个电场，瞬间增加细胞膜的通透性，让双链DNA进入细胞。但在T细胞内，一旦引入较长的双链DN..段，竟会导致这些细胞的死亡。在经过大量的尝试后，许多科学家们都放弃了这个挑战。他们认为，较长的双链DNA会对T细胞产生毒性。相比之下，引入单链寡核苷酸则更具可行性。
但Theo则不信这个邪。从之前的一些研究结果中，他敏锐地观察到，如果在电穿孔技术中同时应用CRISPR-Cas9系统与双链DNA模板，就有望能减少双链DNA相关的细胞毒性。这给他的研究带来了突破口，也带来了更多的问题：CRISPR和DNA的最佳比例是多少？DNA的质量需要多高？这些T细胞需要特殊培养吗？电穿孔所使用的电流强度是多少？只有各个条件都得到了优化，我们才能有效地使用这种简便的方法，去改造T细胞。
▲数千次的失败，才带来了这套完善的改造流程（图片来源：《自然》）
除了挨个尝试之外，Theo没有其他选择。
该研究的负责人Alexander Marson教授认为，Theo的坚守对成功至关重要。尽管主流学界都相信T细胞只能耐受小片段的DNA，都相信病毒载体不可或缺，但Theo不惧权威，“展现出了海格力斯般的努力，测试了数千种不同的条件”。
▲利用这套系统，研究人员们可以“随心所欲”地将绿色荧光蛋白表达于细胞的不同部位（图片来源：《自然》）
